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6 第五章 诊断用制品制造技术64页PPT

  6 第五章 诊断用制品制造技术64页PPT_纺织/轻工业_工程科技_专业资料。诊断用生物制品 (diagnosticum) 包括诊断用抗原、诊断用抗体(血清)和标 记抗体等三类。 该类制剂的最基本要求是特异性强和敏感度 高。生物制剂用于诊断的原理(略) 诊断液: 利用细

  诊断用生物制品 (diagnosticum) 包括诊断用抗原、诊断用抗体(血清)和标 记抗体等三类。 该类制剂的最基本要求是特异性强和敏感度 高。生物制剂用于诊断的原理(略) 诊断液: 利用细菌、病毒和寄生虫培养物、代谢物、 组分(提取物)和反应物等有效物及动物血 清等材料制成的,专门用于动物传染病和寄 生虫病诊断和检疫的一大类制品。 一、诊断抗原 (一)血清学诊断抗原 血清学诊断抗原是用已知微生物和寄生虫、微生 物和寄生虫的组分或浸出物、代谢产物、感染动物组 织制成,用以检测血清中的相应抗体 该类制剂可与血清中的相应抗体发生特异性反应, 形成可见或可以测知的复合物,以确诊动物是否受微 生物感染或接触过某种抗原。 常用的抗原有凝集反应抗原、沉淀反应抗原、补 体结合反应抗原和酶联免疫吸附试验(ELISA)抗原 等。 1、凝集反应抗原 凝集反应抗原是颗粒性抗原,如细菌和红 细胞等。 在有电解质存在条件下,能与特异性抗体 结合,形成肉眼可见的凝集现象。 举例: 布鲁氏菌凝集反应抗原、马流产凝集反应 抗原、鸡白痢全血凝集反应抗原、猪传染性萎 缩性鼻炎I相菌抗原和鸡源支原体平板凝集反应 抗原等。 布鲁氏菌凝集反应抗原 制造及使用方法 ①菌种 抗原性良好的2~3种布鲁氏菌。菌落须为光 滑型。 ②制造要点 将检定合格的种子液,接种于适于布鲁 氏菌生长的琼脂扁瓶上(或液体通气培养基),37℃ 培养2~3d; 加入适量0.5%石炭酸生理盐水,洗下培养物,经纱 布过滤,涂片杂菌检查。 热凝集和吖啶黄凝集试验合格的过滤菌液,在70~ 80℃水浴中杀菌lh,观察无凝集块出现,离心,将下 沉菌体重新悬浮于0.5%石炭酸生理盐水中,此即为 浓菌液,置2~10℃冰箱中保存备用。 ③标化 用石炭酸生理盐水将浓菌液稀释为1:20、 1:24、1:28、1:32、1:36,5个不同稀释度, 将标准阳性血清稀释为1:300、1:400、1:500、 1:600、1:700,5个稀释度。 将稀释的抗原和血清排成方阵进行试管凝 集试验,每只反应管中加抗原和血清各0.5ml, 37℃ 24h观察结果。 观察/测定 当标准阳性血清对标准抗原的凝集价为1:1000“++” 时,在血清1:1000稀释度呈现“++”,1:1200呈现 “-”,“±”或“+”的凝集现象的抗原最小稀释度, 即为浓菌液应稀释的倍数。在下表中(举例)浓菌液的 稀释倍数为1:28,此即为标化抗原的初测结果。 然后再以同法作一次测定,如果第二次结果仍为 1:28倍,则此批浓菌液作1:28倍稀释,即为使用液。 出厂的抗原原液比使用液浓20倍。 菌 液稀释 1:20 1:24 1:28 1:32 1:36 标准抗原 (1:20) 血清最初稀释度 1:300 1:400 1:500 1:600 1:700 加入抗原后的血清稀释度 1:600 1:800 1:1000 1:1200 1:1400 +++ ++ + - - +++ ++ + - - ++++ +++ + + ± - ++++ +++ ++ + - ++++ +++ ++ ++ - ++++ +++ ++ - - ④成品检验 抗原应为乳白色均匀菌液,没有摇不散 的凝块或杂质,没有任何细菌生长。对标 准阳性血清1:1000倍稀释出现“++”凝 集,对阴性血清1:25~1:200稀释均不出 现凝集。 2、沉淀反应抗原 沉淀反应抗原为胶体状态的可溶性抗原,如细菌和寄 生虫的浸出液、培养滤液、组织浸出液、动物血清和 动物蛋白等,与相应抗体相遇,在二者比例合适并有 电解质存在时,抗原抗体相互交联形成免疫复合物达 一定大时,即出现肉眼可见的沉淀。 沉淀抗原是细胞浸出成分,为细微的胶体溶液, 单个抗原的体积小而总面积大,出现反应需要的抗体 量多,故试验时常采取稀释抗原加不稀释的血清,并 以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 沉淀反应抗原分类 由于使用方法不同,沉淀反应抗原又分为环状 反应抗原,如炭疽动物脏器抗原;絮状反应抗 原,如测定抗毒素效价的絮状反应抗原;琼脂 扩散反应抗原和免疫电泳抗原等。 我国用于畜禽沉淀反应抗原有马传染性贫 血琼脂扩散反应(AGP)抗原、鸡传染性法氏囊 病AGP抗原、及马立克氏病(MD)AGP抗原等 多种。 马立克氏病(MD)AGP抗原 用11~13日龄的鸭胚制备成纤维细胞单层培养物, 24h后接种MD病毒感染鸡的脾细胞悬液。接种后24h, 吸出接种物并更换营养液,接毒后约6d,消化细胞, 分瓶,传3代后,细胞培养物即可用于制备MD沉淀抗 原。 一般在75%以上的细胞出现病变时进行收获,在20℃以下冻结,室温融化,如此反复冻融3次,经适当 浓缩后即为抗原。用双扩散法进行诊断。 3、补体结合反应(CF)抗原 补体结合反应包括反应系统(检测系统)和指示系统 (溶血系统)。 反应系统为抗原和抗体。 指示系统是绵羊红细胞及溶血素。 补体可与反应系统的抗原-抗体复合物结合,也可与绵 羊红细胞-溶血素的复合物结合而引起溶血,以观察溶 血与否来判定反应的结果。 在补体的参与下可明显地提高抗原、抗体特异性反 应的敏感性。 我国生产的兽用补体结合反应抗原有马传染性CF 抗原、鼻疽CF抗原、布鲁氏菌CF抗原和钩端螺旋体CF 抗原等。 鼻疽补体结合反应抗原的制造及检验程序 ① 菌种 用1~3株抗原性良好的鼻疽杆菌,接种 在4%甘油琼脂培养基上,37℃培养2d,经检定 合格者后用生理盐水洗下,作为种子培养物。 ② 制造要点 将种子培养物均匀地接种于甘油琼 脂扁瓶,37℃培养3~4d,挑选生长典型和无 杂菌污染者,用灭菌含0.5%石碳酸生理盐水洗 下培养物,121℃ 灭菌30min,置于2~15℃冷 暗处浸泡2~4个月,吸取上清液即为抗原,按 常规

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